No AEEA monomēra līdz dimēram

Zāļu un antivielu attiecība (DAR) ir galvenais antivielu konjugēto zāļu (ADC) kvalitātes rādītājs, kas tieši ietekmē efektivitāti un toksicitāti. Ideāls DAR parasti ir 2-4, taču daudzām efektīvām kravām, piemēram, MMAE un DM1, ir spēcīga hidrofobitāte. Izmantojot īsās ķēdes vai atsevišķus PEG linkerus, DAR, kas pārsniedz 4, izraisa paātrinātu antivielu agregāciju un klīrensu. AEEA-AEEA ieviešana nodrošina efektīvu šīs problēmas risinājumu.
Salīdzinot ar vienu AEEA saiti,AEEA-AEEAdubulto PEG ķēdes garumu un ir spēcīgāka hidrofilitāte. Katra dimēra vienība veido 4 ētera saites un 2 amīda saites, kas var saistīt vairāk ūdens molekulu un veidot blīvāku hidratācijas slāni. Ja vairākas hidrofobas zāles ir savienotas ar antivielu virsmu caur AEEA-AEEA, hidratācijas slānis var efektīvi aizsargāt hidrofobās mijiedarbības starp zālēm un novērst antivielu agregāciju. Eksperimentālie dati liecina, ka ADC, kas konstruēti, izmantojot AEEA-AEEA, saglabā koloidālo stabilitāti (agregācijas ātrumu<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
DAR regulēšanas stratēģija attiecas uz AEEA-AEEA iepriekšēju saistīšanu ar zālēm, izmantojot uz vietas virzītu savienošanas tehnoloģiju, un pēc tam reaģējot ar konstruētu cisteīnu uz antivielas. Pielāgojot saistvielas un antivielu molāro attiecību (parasti no 3:1 līdz 10:1), DAR vērtību var precīzi kontrolēt. Piemēram, 2-kārtīgs pārsniegums var iegūt DAR2 produktu, 4-kārtīgs pārsniegums var iegūt DAR4, un 8 kārtīgs pārsniegums var sasniegt DAR6-8. HIC-HPLC vai masas spektrometrija var precīzi noteikt DAR sadalījumu. Attiecībā uz audzēju indikācijām, kurām nepieciešama liela slodze, piemēram, krūts vēzis ar zemu HER2 ekspresiju un sīkšūnu plaušu vēzis, AEEA-AEEA padara iespējamu augstu DAR un ievērojami uzlabo audzēju nogalinošo efektu. Preklīniskie pētījumi ir parādījuši, ka DAR6 ADC palielina audzēja inhibīcijas ātrumu par aptuveni 40%, salīdzinot ar DAR4 ADC tajā pašā devā, būtiski nepalielinot toksicitāti.